ISI 31-1e Определение общего числа жизнеспособных микроорганизмов

1. Область применения

Метод применим к крахмалу в нативной и модифицированной формах.

 

KJSV Sep 1964
Rev.: LT 14 Jan 1998

2. Принцип

Образец последовательно разбавляют, инкубируют на агаровых пластинках и производят подсчёт

 

 

3. Аппаратура

3.1 Электрический термостатированный инкубатор

 

 

3.2 Чашки Петри, диаметр прибл. 9 см

использовать одноразовые стерильные наконечники

 

3.3 Пипетка 1000 микролитров со сменными наконечниками

или стеклянная пипетка

 

3.4 Пипетка 100 микролитров со сменными наконечниками

или стеклянная пипетка

 

3.5 Лабораторные весы

 

 

3.6 Колбы из пирексного стекла с винтовой крышкой, 100 мл.

 

 

3.7 Пробирки с крышками для субстрата 160 мм x 16 мм

 

 

3.8 Автоклав

Стерилизовать при 120 +/- 2 oC 20 минут.

 

3.9 Шпатель Дригальского

 

 

3.10 Горелка Бунзена

 

Все работы производить в антисептических условиях

4. Питательная среда

4.1 Агаровые пластины. Расплавить агар и залить в пирексную колбу. Стерилизовать в автоклаве

 

 

4.2 Изотонический раствор, 0.9% NaCl. Налить по 9 мл в пробирки (3.7). Стерилизовать в автоклаве

Физиологический раствор

 

4.3 Изотонический раствор, 0.9% NaCl. Налить 90 мл в колбу (3.6). Стерилизовать в автоклаве

 

 

5. Методика проведения

Расплавить агар и налить приблизительно по 5 мл в стерильные чашки Петри

или использовать готовые стерильные пластины

Разведение 101

Отвесить 10 г (W) образца с точностью до 100 мг в стерильную колбу (3.6). Добавить половину объёма физиологического раствора из колбы (4.3). Закрыть колбу и энергично встряхнуть. Влить оставшийся физиологический раствор (4.3).

Тщательно суспензировать

 Разведение 102

Добавить пипеткой 1 мл разведения 101 в пробирку (4.2). Перемешать

 

Разведение 10x

Продолжать последовательное разведение так, чтобы ожидаемое число колоний было в пределах от 30 до 300.

 

Посев

Перенести x мл разведения на каждую из трёх агаровых пластин и равномерно распределить с помощью шпателя Дригальского. Пометить чашки.

Также распределить холостую пробу только с физиологическим раствором

 

Распределить 1 мл разведения 101 и пометить чашки D = 1. Распределить 0,1 мл разведения 101 и пометить чашки D = 2. Распределять по 0,1 мл последующих разведений и маркировать чашки D = 3 и т. д.

Использовать только те разведения, в которых ожидаемое число колоний лежит в пределах от 30 до 300

Инкубация

Инкубировать агаровые пластины вверх дном при 30 oC в течение 3 дней.

 

Подсчёт

Пересчитать колонии (T) на чашках с числом колоний от 30 до 300

 

 

6. Вычисления

Записать общее число жизнеспособных микроорганизмов с точностью множителя до одного знака после запятой (среднее для трёх чашек):

Число микроорганизмов на г образца = T x 10D / W

 

Например:
1.7
x104 /г (ISI 31-1e)

7. Замечания

Альтернативный метод: добавить х мл разведения в пустые чашки Петри и залить расплавленным агаром при температуре не более 45 oC. Содержимое распределить вращательными движениями.

 

 

Посуду стерилизовать в автоклаве при температуре 120 +/-2 0C 20 минут или  горячим воздухом при температуре 160 +/-5 0C 2 часа или 140 +/-5 oC 3 часа.

 

Тщательно упакованную

8. Ссылка

NMKL 86 (Комиссия Северных стран по анализу пищевых продуктов)

 


Copyright© 1999 by International Starch Institute http://www.starch.dk/isi/methods/31bac.htm


© Перевод. БИПП, 2006

Вернуться к списку стандартных методов

Вернуться к списку справочных материалов

На главную