ISI 30-2e Определение числа термостабильных спор
1. Область применения |
Метод применим для гранулированного крахмала в нативной и модифицированной форме.
|
LT 18 Dec 1964 |
||||||||||||||||||||||||||||||
2. Принцип |
Образец последовательно разбавляют, инкубируют на пептоновом субстрате, пастеризуют и снова инкубируют
|
|
||||||||||||||||||||||||||||||
3. Аппаратура |
3.1 Термостатированный электрический инкубатор |
|
||||||||||||||||||||||||||||||
|
3.2 Пипетка 2000 -3000 микролитров с одноразовыми наконечниками |
или стеклянная пипетка |
||||||||||||||||||||||||||||||
|
3.3 Пипетка 500 микролитров с одноразовыми наконечниками |
или стеклянная пипетка |
||||||||||||||||||||||||||||||
|
3.4 Лабораторные весы |
|
||||||||||||||||||||||||||||||
|
3.5 Колба с широким горлом, 100 мл. |
|
||||||||||||||||||||||||||||||
|
3.5 Пробирки для субстрата 160 м x 16 мм с крышками |
использовать стерильные одноразовые |
||||||||||||||||||||||||||||||
|
3.7 Автоклав |
Стерилизовать при 120 +/- 2 oC 20 минут. |
||||||||||||||||||||||||||||||
|
3.8 Горелка Бунзена
|
на протяжении всего опыта работать в антисептических условиях |
||||||||||||||||||||||||||||||
4. Питательная среда |
4.1 Пептоновое молоко. |
|
||||||||||||||||||||||||||||||
Приготовление пептонового молока |
10 г пептона растворить свежем снятом молоке. При необходимости подогреть. Охладить и долить молоком до 1 литра. Добавить 10 мл 1% спиртового раствора бромкрезолпурпура. Растворить 0.8 г цистеингидрохлорида в небольшом количестве воды и нейтрализовать полученный раствор гидроксидом калия 2 Н до pH 7.2 - 7.3. Добавить раствор цистеингидрохлорида в пептоновое молоко.
|
BACTO пептон или эквивалентный |
||||||||||||||||||||||||||||||
5. Методика проведения |
Налить пептоновое молоко в пробирки прибл. по 10 мл, закрыть и стерилизовать в автоклаве при 115 oC в течение 20 минут. |
Стерилизованный субстрат хранится 1-2 недели |
||||||||||||||||||||||||||||||
Разведение I |
В асептических условиях взвесить 10 г (W) образца крахмала с точностью до 100 мг, перенести в стерильную колбу 100 мл. Развести до 4-1 тремя частями стерилизованной воды. Закрыть колбу и энергично встряхнуть. |
Крахмал должен быть распределён равномерно по дну колбы |
||||||||||||||||||||||||||||||
Разведение II |
Развести до 4-2 3 мл полученного (разведение I) крахмального раствора в пробирке 9 мл стерилизованной воды (A5) |
|
||||||||||||||||||||||||||||||
Разведение III |
Развести до 4-3 3 мл полученного (разведение II) крахмального раствора в пробирке 9 мл стерилизованной воды (B5) |
|
||||||||||||||||||||||||||||||
Посев |
Засеять три пробирки со стерильным субстратом 2 мл каждого из полученных крахмальных растворов (I, II и III) а также засеять три пробирки со стерильным субстратом по 0,5 мл раствора III (получая разведение 4-4) – получая в общей сложности 12 засеянных пробирок с субстратом.
|
|
||||||||||||||||||||||||||||||
Пастеризация |
Пастеризовать засеянные пробирки при 80 oC в течение 20 минут на водяной бане. |
|
||||||||||||||||||||||||||||||
Инкубация |
Охладить и инкубировать при 30oC 4 дня |
|
||||||||||||||||||||||||||||||
Подсчёт |
Пробирка с субстратом положительная, если после четырёх дней инкубации отмечается рост бактерий. Число термостойких спор определяется по следующей таблице:
|
|
||||||||||||||||||||||||||||||
6. Вычисления |
Записать число термостабильных спор на г
|
|
||||||||||||||||||||||||||||||
7. Замечание |
Стерилизовать посуду в автоклаве при 120 +/-2 0C 20 минут или в горячем воздухе 160 +/-5 0C 2 часа или 140 +/-5 oC 3 часа
|
|
||||||||||||||||||||||||||||||
8. Ссылка |
Лабораторный журнал Исследовательского центра Роскилда, стр. 114 |
|
Copyright© 1999 by International Starch Institute http://www.starch.dk/isi/methods/30spores.htm
© Перевод. БИПП, 2006
Вернуться к списку стандартных методов
Вернуться к списку справочных материалов