ISI 24-1e Определение содержания протеина методом Кьельдаля
1. Область применения |
Метод применим к крахмалу, гидролизату крахмала и патоке.
|
LT 24 Jan.. 1967 |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
2. Принцип |
Органическое вещество деструктируют серной кислотой. Освобождающийся в виде ионов аммония азот очищают, собирают и титруют.
|
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3. Аппаратура |
3.1 Аналитические весы с точностью измерения до 0,1 мг. |
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
3.2 Дистилляционная установка Кьельдаля, состоящая из с 500 мл колбы Кьельдаля, насадки Кьельдаля, 50-200 мл капельной воронки, 1000 мл испарительной колбы, холодильника и 500 мл конической колбы (приёмника)
|
Использовать наклонный холодильник |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
4. Реагенты |
4.1 CuSO4*5H2O
|
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
5. Методика проведения |
Отвесить образец в соответствии с таблицей с точностью до 1 мг и перенести в 500 мл колбу Кьельдаля. Добавить в соответствии с таблицей один из реагентов, CuSO4*5H2O, Se, K2SO4, графит и концентрированную H2SO4. Закрыть насадкой Кьельдаля. |
Использовать пергаментную бумагу, если удобно. |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Деструкция |
Поставить колбу Кьельдаля на плитку и осторожно нагреть, избегая интенсивного кипения. Когда вспенивание прекратится, усилить нагревание и продолжать деструкцию в течение одного часа до появления светло-зеленого окрашивания содержимого колбы. Охладить на воздухе. |
Во избежание потери азота нагревать колбу только ниже уровня жидкости. |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Дистилляция |
Добавить воду или кислоту, в соответствии с таблицей, в приёмную колбу. Поместить колбу так, чтобы жидкость покрывала выходное отверстие холодильника. Экранировать приёмную колбу от нагревателя во время дистилляции. |
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
Присоединить колбу Кьельдаля к дистилляционной установке. Ополоснуть насадку и внутреннюю часть горла 100 мл дистиллированной воды |
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
Добавить немного пемзы и 4 гранулы Zn. Собрать установку и включить подачу охлаждающей воды. Налить 200 мл NaOH, 33% (масс.) для определения азота в капельную воронку. Открыть клапан и добавить приблизительно 180 мл р-ра NaOH в испарительную колбу. Нагреть до кипения. При необходимости добавить р-р NaOH до достижения коричневой окраски, избегая при этом избытка NaOH. Собрать примерно 200 мл дистиллята. |
Носик воронки не должен быть пустым. |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Титрование |
Немедленно добавить индикатор в соответствии с таблицей и титровать. |
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Холостой опыт |
Провести холостой опыт с водой, реагентами и пергаментной бумагой. |
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Протеин, растворимый в холодной воде |
Растворимый в холодной воде протеин в крахмале: развести 200 г крахмала в дистиллированной воде в 1000 мл мерной колбе. Добавить дистиллированную воду до метки. Перелить в 1000 мл стакан. Перемешивать 30 минут при комнатной температуре и отфильтровать на бумажном фильтре. Слить первые 100 мл фильтрата. Поместить 250 мл фильтрата в колбу Кьельдаля и провести процесс, как описано выше. |
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Таблица |
|
Для удобства метод адаптирован для анализа "разных" соединений, случающегося иногда. Для постоянного анализа других соединений следует применять специальные методы. Вместо селена в качестве катализатора может быть использован сульфат натрия. |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
|
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
6. Вычисления |
Вычислить содержание протеина в образце, усредняя результаты измерения для двух опытов с точностью до двух знаков: |
Протеин = N * 6.25 |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Гидролизат, сироп глюкозы, общий сахар, крахмал |
Протеин % СВ = (a-blankacid) * Nacid*14*100*100*6.25/(g*d*1000) |
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Крахмал, фракция, растворимая в холодной воде |
Протеин, растворимый в холодной воде % СВ крахмала = (a-blankacid) * Nacid*F |
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Разное |
Протеин % СВ = (blankalkali -t) * Nalkali*875/(g*d) |
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
где: |
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
g = вес образца, г |
показатель Брикса может применяться для гидролизата и сиропов |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
a = мл кислоты на титрование образца |
blankacid ~ 0 мл |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
blankalkali = мл щёлочи на титрование в холостом опыте
|
blankalkali ~ 30 мл |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
7. Замечания |
ISO 3188 и ISO 5378 - несложные методы, рекомендуемые даже в текущей работе.
|
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
8. Ссылки |
ISO 3188 (метод титрования по Кьельдалю); ISO 5378 (спектрофотометрический метод Кьельдаля)
|
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
9. Аппарат Кьельдаля |
|
|
Copyright© 1999 by International Starch Institute http://www.starch.dk/isi/methods/24prot.htm
© Перевод. БИПП, 2006
Вернуться к списку стандартных методов
Вернуться к списку справочных материалов